【产品名称】
商品名称：戊型肝炎病毒（HEV）检测试剂盒（荧光PCR法）
Name ：Hepatitis Virus type E Detection Kit （Real-Time PCR Method）
【包装规格】50T/盒
【预期用途】
戊型肝炎是由戊型肝炎病毒感染而引起的一种急性、自限性疾病，它是一种人畜共患病。本试剂盒适用于检测的肝脏组织、全血等标本中戊型肝炎病毒RNA，适用于戊型肝炎病毒感染的辅助诊断。
【检验原理】
本试剂盒用根据戊型肝炎基因保守区设计特异性引物和荧光探针[1-2]，用一步法荧光RT-PCR 技术对戊型肝炎病毒RNA 进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染病料的病原学诊断。

【试剂组成】

说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过5 次，有效期12 个月。
【适用仪器】
ABI7500、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量PCR 检测仪。
【标本采集】
病死或扑杀动物，取肝脏组织；待检活动物，抽取全血5mL 至无菌离心管。
【保存和运输】
采集或处理好的样品在 2℃~8℃条件下保存应不超过 24 h；若需长期保存，应放置-70℃以下保存，冻融不超过 3 次。
【使用方法】
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理
每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取 0.05g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；全血样品待血凝后，2000 r/min~3000 r/min 离心 10min，取血清于 1.5mL 灭菌离心管中。
1.2 核酸提取
推荐采用上海烜雅生物科技有限公司生产的核酸提取试剂（离心柱法）进行核酸提取，请按照试剂说明书
进行操作。
2. 试剂配制（试剂准备区）
根据待检测样本总数，设所需要的PCR 反应管管数为N（N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管数每满10 份，多配制1 份），每测试反应体系配制如下表：

将混合好的测试反应液分装到PCR 反应管中，20μL/管。
3. 加样（样本处理区）
将步骤1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取5μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。
4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于荧光定量PCR 仪反应槽内；
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为25μL；
荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，请勿选择ROX 参比荧光，选择None 即可。

推荐循环参数设置：

5. 结果分析判定
5.1 结果分析条件设定（请参照各仪器使用说明书进行设置，以分析ABI7500 仪器为例）反应结束后自动保存结果，根据分析后图像调节Baseline 的Start 值、End 值以及Threshold 值（用户可根据实际情况自行调整，Start 值可设在3～15、End 值可设在5～20，使阈值线位于扩增曲线指数期，阴性质控品的扩增曲线平直或低于阈值线），点击Analyze 自动获得分析结果。
5.2 结果判断
阳性：检测通道Ct 值≤40，且曲线有明显的指数增长曲线；
阴性：样本检测结果Ct 值>40 或无Ct 值。
5.3 质控标准
阴性质控品：无特异性扩增曲线或无Ct 值显示；
阳性质控品：扩增曲线有明显指数增长期，且Ct 值≤32；
以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

6. 检测方法的局限性
1.样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
2.样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
3.阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
4.病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
5.不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
6.试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
7.本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

【注意事项】
1.所有操作严格按照说明书进行；
2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3.反应液应避光保存；
4.反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7.实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
【参考文献】
[1] 沃恩康, 洪艳, 王怡婷, 等. 实时荧光PCR 定量检测戊型肝炎病毒方法的建立[J]. 中国人兽共患病学报,
2008.
[2] 李峰, 孟继鸿, 董晨, 等. 戊型肝炎病毒通用性PCR 引物的设计及其基因分型的研究[J]. 病毒学报, 2009.
[3] 国家质量监督检验检疫总局. SN/T 4235-2015 猪戊型肝炎检疫技术规范[S].
【生产企业】
企业名称：上海烜雅生物科技有限公司

【产品图片】

【生产企业】

企业名称：上海烜雅生物科技有限公司

生产地址：金海公路3265号14幢11546室

上海烜雅生物科技有限公司生产的戊型肝炎病毒(HEV)荧光PCR检测试剂盒供应质量高，价格实惠，售后有保证。为您的实验保驾护航。

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本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断。

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